艾滋病的酶联免疫分析
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酶联免疫吸附测定法酶联免疫测定方法是以抗原和抗体分子为测定靶标的方法,亦是目前最为常用的实验室诊断方法之一。
从理论上说,一种生物或生理活性物质,只要有办法得到其特异的抗体,就可以建立这种物质的酶联免疫测定方法。在以前看来一些难以进行质量测定的微量生物活性物质,如受体、细胞因子以及酶等均可使用酶联免疫测定技术来测定。酶联免疫测定方法是以抗原抗体间的特异反应为基础的,其与生化的化学反应有着本质的区别,并且由于标记物如同位素、酶、荧光素、微量元素、发光物质等的掺人,酶联免疫测定技术从低灵敏的免疫沉淀和免疫凝集反应进入到了高灵敏的放射免疫、酶免疫、荧光免疫和发光免疫测定时代,可见酶联免疫测定更多的是用于生物活性物质的微量测定。
目前在上,很多重要的疾病诊断标志物均使用酶联免疫测定方法来检测,如抗HAVIgM,乙肝“两对半”、抗HCV,抗HIV,梅毒抗体、优生优育TORCH系列、性病病原体的抗原或抗体等传染性病原体血清标志物、激素、肿瘤标志物、自身抗体、特种蛋白、细胞因子和治疗药物以及HBVDNA,HCV-RNA,遗传病基因、肿瘤基因、基因突变等,这些标志物的检测质量直接关系到患者的诊断和治疗。
而在血站,HBsAg,抗HCV,抗HIV和梅毒抗体等标志物的检测,哪怕是1%的错误,对将要接受输血的特定患者来说,就是100%的灾难。近期,在电视、报纸等新闻媒体中,常可见到一些有关医患纠纷的报道,其中一些就与酶联免疫测定有关,如输血后丙肝病毒、艾滋病毒感染的发生,性病检测的假阳性等。可见,酶联免疫测定的质量控制有多么重要。
酶联免疫吸附测定法-ELISA的应用
ELISA应用的范围很广,而且正在不断地扩大,原则上ELISA可用于检测一切抗原、抗体及半抗原,可以直接定量测定体液中的可溶性抗原。酶免疫试验(EIA)结合光学显微镜或电子显微镜可进行抗原定位与结构的研究,用酶标记抗原或抗体结合免疫扩散及免疫电泳可提高试验的敏感性。在实际应用方面可作疾病的临床诊断、疾病监察、疾病普查、法医检查、兽医及农业上的植物病害的诊断检定等。因此,它和生物化学、免疫学、微生物学、药理学、流行病学及传染病学等方面密切相关。检查抗原和半抗原方面:在内分泌方面已经用于检测雌性激素、绒毛膜促性腺激素、黄体素、胰岛素、皮质醇、促甲状腺素和孕酮等,其敏感性与RIA相当,在血液学方面可用于检查凝固因子(如第Ⅷ凝固因子)、红细胞抗原及结合球蛋白(HaptoGlobin)等,在肿瘤方面已试用检查甲胎蛋白(AFP)癌胚抗原(CEA),对前者的敏感性已达到与放射免疫试验相当的水平,但对CEA检查的敏感性较低,目前尚不能用于常规诊断,在传染病的诊断方面正在日益扩大,其中最满意的是用于检查乙型肝炎表面抗原。国内外已有ELISA检测的商品供应。尚有用于检查霍乱弧菌、大肠肝菌、绿脓杆菌和破伤风梭菌毒素;脑膜炎球菌及淋球菌抗原;检查免疫抑制病人中常见的白色念殊菌抗原,检查病人或病兽的粪便中的轮状病毒,自病人标本中检查甲肝病毒、疱疹病毒、麻疹病毒、流感、呼吸道融合及巨细胞病毒等。还可用于植物组织浆液中检查植物病毒。此外尚试用于测钩体抗原及血吸虫病的循环抗原等。在免疫化学方面可用于检测白蛋白,免疫球蛋白的各种组份,也可用于检测补体成份,如:ciq,还能用于检测蛇毒。
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