hiv抗体阴性的检测方法
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目前作为一种诊断工具使用,主要包括抗艾滋病病毒抗体检测、病毒培养、核酸检测和抗原检测。其中对病毒抗体的检测是最常规使用的方法,这不但是由于这类检测特异性、敏感性较高,方法相对简便、成熟,更重要的原因是HIV抗体在病毒感染后除早期短暂的”窗口期”外的整个生命期间长期稳定地存在并可被检测到。在一些特殊情况下,当抗体检测无法满足HIV感染诊断的需要时,病毒分离及测定、核酸检测、抗原检测可作为辅助手段使用,这包括对非典型血清学反应样品的诊断、HIV感染的窗口期诊断、新生儿早期诊断和对特殊样品的诊断。
检测方法
酶联免疫吸附试验
目前应用的ELISA法有8种之多。它们的特异性和敏感性超过99%。
颗粒凝集法
PA为快速、简便的一种筛选方法。如属阳性,应经WB证实。PA不需任何特殊仪器,其结果用肉眼可判别。全过程仅需5分钟。缺点有假阳性,且价格昂贵。
快速试剂
(一)人类免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗体诊断试剂(胶体硒法)
人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒是用于在体外,肉眼观察,定性免疫测定法,对血清或血浆中HIV-1和HIV-2抗体检测有助于感染者HIV-1和HIV-2抗体。本品仅用于无偿献血者在现场筛查和临床急救时使用,本品检测阳性,需进行进一步的筛选确认。
(二)InstantCHEKTM-HIVl+2金标快速诊断试剂
InstantCHEKTM-HIV1+2是一种快速、简单、灵敏的检验方法,用以检测艾滋病病毒(HIV-1和HIV-2)的抗体。该方法适用于初筛检测,凡由该试剂测定为阳性者,需用另一种方法检测如ELISA或用蛋白印记法确定。
确认实验
免疫印迹试验(WB)、条带免疫试验(LIATEK HIVⅢ)、放射免疫沉淀试验(RIPA)及免疫荧光试验(IFA)。国内常用的确认试验方法是WB。
免疫印迹实验(westernblot,WB)是广泛用于许多传染病诊断的实验方法,就HIV的病原学诊断而言,它是首选的用以确认HIV抗体的确认实验方法,WB的检测结果常常被作为鉴别其他检验方法优劣的“金标准”。
确认试验流程
有一种HIV-1/2混合型和单一的HIV-1或HIV-2型。第一个HIV-1/2混合试剂检测,如果有消极反应,HIV抗体阴性报告;如果有一个积极的报告HIV-1抗体阳性;如果不满足标准阳性,判为HIV抗体检测结果是不确定的。
如果出现HIV-2型的特异性指示条带,需用HIV-2型免疫印迹试剂再做HIV-2的抗体确认试验,呈阴性反应,报告HIV-2抗体阴性;呈阳性反应则报告HIV-2抗体血清学阳性,并将样品送国家参比实验室进行核酸序列分析,
WB的敏感性一般不低于初筛实验,但它的特异性很高,这主要是基于HIV不同抗原组分的分离以及浓缩和纯化,能够检测针对不同抗原成分的抗体,因而能够用WB方法鉴别初筛实验的准确性。从WB确认试验结果看出,初筛试验尽管选择质量较好的试剂,如第三代ELISA,仍会有假阳性出现,必须通过确认试验才能得出准确结果。
免疫荧光实验(IFA)
IFA法经济、简便、快速,曾被FDA推荐用于WB不确定样品的诊断。但需要昂贵的荧光显微镜,需要受过良好训练的技术人员、观察和解释结果易受主观因素的影响,结果不宜长期保存,IFA不宜在一般的实验室开展和应用。
HIV抗体确证试验结果报告
(1)符合HIV-1抗体阳性判断标准,报告“HIV-1抗体阳性(+)”,并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作。符合HIV-2抗体阳性判断标准,报告“HIV-2抗体阳性(+)”,并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作。
(2)符合HIV抗体阴性判断标准,报告“HIV抗体阴性(-)”。如疑似“窗口期”感染,建议进一步做HIV核酸检测,尽早明确诊断。
(3)符合HIV抗体不确定判断标准,报告“HIV抗体不确定(±)”,在备注中应注明等待“4周后复检”。
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